All-in-One First-Strand Synthesis Mix
货号 / 型号：M501S
All-in-One First-Strand Synthesis Mix 是一款即用型逆转录试剂盒，集成第一链 cDNA 合成与 gDNA 去除功能，包含热稳定 MMLV 逆转录酶、缓冲液、RNase 抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN 及随机引物。 采用 dsDNase 技术特异性去除 RNA 样本中的基因组 DNA 污染，避免 qPCR 共扩增影响定量准确性。支持一步法与两步法灵活操作，适用于 RT-qPCR 基因表达分析。 适用于含 Poly(A) 结构的真核 mRNA，以及原核 RNA、rRNA、tRNA 等模板（不适用于 miRNA 等小 RNA）。
产品介绍
产品简介
All-in-One First-Strand Synthesis Mix 是一款即用型逆转录试剂盒，集成了第一链 cDNA 合成与基因组 DNA（gDNA）去除功能。试剂盒包含逆转录所需的全部组分（热稳定 MMLV 逆转录酶、缓冲液、RNA 酶抑制剂、dNTPs、Oligo(dT)20VN 及随机引物），并采用 dsDNase 技术解决 RNA 样本中常见的 gDNA 污染问题。
若 gDNA 未被去除，在后续 qPCR 中会与 cDNA 共扩增，影响基因表达定量准确性。本产品所用的 dsDNase 能特异性消化双链 DNA（包括 dsDNA 及 DNA-RNA 杂合链中的 DNA 链），且具有热敏感性，在后续逆转录反应温度下可快速、不可逆地失活。用户可根据起始 RNA 中 gDNA 污染程度，灵活选择一步法或两步法操作。
产品特点
- All-in-One 设计：预混逆转录组分，含 Oligo(dT)20VN 与随机引物，开箱即用
- gDNA 高效去除：dsDNase 特异性消化双链 DNA，避免 qPCR 共扩增干扰
- 灵活操作模式：支持一步法（gDNA 去除 + 逆转录同步）与两步法（分步处理）
- 热稳定逆转录：采用热稳定 MMLV 逆转录酶，55℃ 高效合成 cDNA
- 模板兼容广：适用于含 Poly(A) 的真核 mRNA，及原核 RNA、rRNA、tRNA 等
产品组成
| 货号 | 产品组成 | 规格 |
|---|---|---|
| M501S | All-in-One First-Strand Synthesis Mix | 400 μL |
| dsDNase | 2 × 50 μL | |
| 10×dsDNase | 200 μL | |
| Nuclease-Free Water | 2 × 1 mL |
使用方法
1. 一步法
当 RNA 质量较高，或反应中 RNA 拷贝数较高、目标基因拷贝数较高时，可将去除基因组 DNA 与反转录合为一步操作。
1.1 反应体系（20 μL）
| 组分 | 添加量 |
|---|---|
| All-in-One First-Strand Synthesis Mix | 4 μL |
| dsDNase | 1 μL |
| RNA Template | 50 ng ~ 1 μg |
| Nuclease-Free Water | 加水至 20 μL |
1.2 ~ 1.6 操作步骤：移液器轻柔吸打混匀、瞬离 → 37℃ 2 min（去除 gDNA）→ 55℃ 15 min → 85℃ 5 min 终止反应。产物可立即用于 qPCR，或暂放 4℃/冰上；长期保存建议 -20℃ 及更低温度。
2. 两步法
若提取的 RNA 中 gDNA 含量很高，或对 gDNA 消除效果要求很高，建议采用两步法。
2.1 基因组 DNA 污染去除（10 μL）
| 组分 | 添加量 |
|---|---|
| 10×dsDNase | 1 μL |
| dsDNase | 1 μL |
| RNA Template | 50 ng ~ 1 μg |
| Nuclease-Free Water | 加水至 10 μL |
混匀、瞬离 → 37℃ 2 min（gDNA 污染严重可延长至 5 min）→ 65℃ 2 min 使 dsDNase 失活，冰上待用。
2.2 第一链 cDNA 合成（20 μL）
| 组分 | 添加量 |
|---|---|
| All-in-One First-Strand Synthesis Mix | 4 μL |
| 步骤 2.1 反应产物 | 10 μL |
| Nuclease-Free Water | 加水至 20 μL |
混匀、瞬离 → 55℃ 15 min（目标 RNA 不含 Poly A 结构时，可预先 25℃ 10 min）→ 85℃ 5 min 终止反应。产物处理同一步法。
注意事项
- 预混液已含 Oligo(dT)20VN 和随机引物，适用于含 Poly(A) 的真核 mRNA，也适用于原核 RNA、rRNA、tRNA 等，不适用于 miRNA 等小 RNA 模板
- 随机引物会在 RNA 任意位置起始逆转录，不建议用于真核生物全长 cDNA 克隆
规格参数
货号：M501S 规格：All-in-One Mix 400 μL + dsDNase 2×50 μL + 10×dsDNase 200 μL + Nuclease-Free Water 2×1 mL 储存：-30 ~ -15℃，避光保存 2 年；≤0℃ 运输
